Nukleázy (DNázy a RNázy)

Restrikční endonukleázy

Nukleázy pro štěpení DNA a RNA 

Naše nukleázy se liší specifičností štěpení i vlastnostmi, jako je optimální pH, což umožňuje výzkumníkovi vybrat si trávicí enzym, který nejlépe vyhovuje potřebám experimentu. Deoxyribonukleáza I ze savčích zdrojů například poskytuje produkty s terminálním 5' P1 z Penicillium citrinum - rozkládá jednořetězcovou DNA a RNA, ale ne dvouřetězcovou DNA. Ribonukleáza A hydrolyzuje jakoukoli RNA kontaminující vzorky proteinů nebo preparáty plasmidové DNA. Mnohé z těchto enzymů mají další využití v molekulární biologii. Například DNáza I "nařízne" DNA, aby umožnila začlenění značených bází. RNáza A je nástrojem v testu ochrany proti RNáze, který měří množství specifických mRNA.

Deoxyribonukleáza I a deoxyribonukleáza II DNase Enzymy/h2>

Deoxyribonukleáza I katalyzuje endonukleolytické štěpení dvouvláknové i jednovláknové DNA za vzniku koncových produktů 5'-fosfodinukleotidu a 5'-fosfooligonukleotidu. Produktem hydrolýzy je komplexní směs 5'-fosfátových mononukleotidů a oligonukleotidů. V přítomnosti hořečnatých iontů napadá DNáza I každé vlákno DNA nezávisle a místa štěpení jsou náhodná. V přítomnosti manganu (II) štěpí DNáza I obě vlákna DNA přibližně na stejném místě. Většina protokolů používá s DNázou I hořečnaté ionty, ale pro specifické účely se používá mangan. Deoxyribonukleáza II navíc katalyzuje endonukleolytické štěpení dvouvláknové i jednovláknové DNA za vzniku nukleosidových 3'-fosfátů a 3'-fosfooligonukleotidových koncových produktů. Rozsah pH pro aktivitu je 4,0 až 6,5, přičemž při pH 6,5 je aktivních pouze asi 15 % a optimum je pH 5,0. Optimální stabilita enzymu je při pH 5 - 5,5, s rychlou inaktivací při pH 8,5 při 30 °C. Nabízíme širokou kolekci enzymů DNázy pro podporu různých typů vzorků a aplikací. Ať už v lyofilizované nebo tekuté formě, některé z našich DNáz obsahují výrazně nízké koncentrace RNáz nebo proteáz, které chrání váš vzorek před nežádoucím rozkladem.

Ribonukleáza A, ribonukleáza H a ribonukleáza T₁ RN.ase Enzymy

Ribonukleáza A katalyzuje endonukleolytické štěpení RNA za vzniku nukleosid 3'-fosfátů a 3'-fosfooligonukleotidů končících na Cp nebo Up. Mezi aktivátory RNasy A patří draselné a sodné soli. Optimální teplota pro aktivitu je 60 °C, ačkoli enzym vykazuje aktivitu při 15-70 °C. Optimální pH je 7,6, s rozmezím aktivity 6-10. Nejvyšší aktivitu vykazuje jednovláknová RNA. RNáza A je velmi stabilní enzym a odolává teplotám až do 100 °C. Při 100 °C je RNáza A nejstabilnější v rozmezí pH 2,0 až 4,5. Ribonukleáza H specificky hydrolyzuje fosfodiesterové vazby RNA v duplexech RNA:DNA za vzniku produktů s 3'-hydroxylovými a 5'-fosfátovými konci. Rozkládá pouze RNA složku hybridu DNA-RNA (RNA, která je vodíkově vázána na komplementární vlákno DNA).

Ribonukleáza T₁ navíc katalyzuje dvoustupňové endonukleolytické štěpení RNA za vzniku nukleosid 3'-fosfátů a 3'-fosfooligonukleotidů končících převážně na Gp. Při reakci dochází ke štěpení mezi 3'-fosfátovou skupinou guanidinového ribonukleotidu a 5'-hydroxylem sousedního nukleotidu. Výchozím produktem je cyklický 2':3' fosfát nukleosidu, který je hydrolyzován na odpovídající 3'-nukleosidfosfát. V roztoku je odolný vůči teplu (100 °C po dobu 10 minut při pH 6) a kyselině, ale nestabilní v alkalickém roztoku (>pH 9). Je třeba poznamenat, že reakci katalyzovanou enzymem nelze zastavit zahřátím reakční směsi na 100 °C. Nabízíme širokou kolekci enzymů RNáz, abychom podpořili různé typy vzorků a aplikací. Ať už se jedná o lyofilizovanou nebo tekutou formu, některé z našich RNáz obsahují výrazně nízké koncentrace proteáz, které chrání vzorek před nežádoucím štěpením proteinů.