Kvantifikace bílkovin

Absorpční testy UV záření

Použití ultrafialové (UV) absorbance k měření koncentrace bílkovin je relativně jednoduchý kvantifikační test bílkovin. Aminokyseliny s aromatickými postranními řetězci (tryptofan, tyrosin atd.) poskytují bílkovinám charakteristickou UV absorbanci při 280 nm. Protože tyto aminokyseliny absorbují UV světlo při 280 nm, lze absorbanci při této konkrétní vlnové délce získat pomocí spektrofotometru a použít ji k odhadu koncentrace bílkovin ve vzorcích. Tento relativně rychlý test se v laboratořích často používá a pro odhad koncentrace bílkovin se obvykle používá Warburg-Christianova metoda. Použití UV absorbance pro stanovení koncentrace bílkovin však může mít vysokou variabilitu, protože nebílkovinné složky ve vzorku mohou interferovat s měřením absorbance. Navíc směsi s různými proteiny ve vzorku mohou způsobit rozdílné hodnoty absorbance v důsledku rozdílného složení aminokyselin.

Assaye založené na činidlech

Assaye založené na činidlech překonávají problémy s kompatibilitou, které se vyskytují u metod UV absorbance. Mezi příklady testů založených na činidlech pro kvantifikaci proteinů patří ty, které využívají kolorimetrické metody, jako jsou testy kyseliny bicinchoninové (BCA), Lowryho a Bradfordův test. V tomto případě se používá BCA metoda a Lowryho metoda zahrnují tvorbu komplexu měď-protein. Jedná se o citlivé testy, které jsou méně variabilní než Bradfordův test. Bradfordův test je však rychlý, snadno proveditelný a na rozdíl od BCA a Lowryho testů je kompatibilní s některými redukčními činidly.

Imunologické testy

Některé testy nemusí být schopny podpořit přesnou kvantifikaci proteinů, pokud je ve vzorku více proteinů nebo jsou jejich množství pod prahem detekce. Výkonné imunoanalytické technologie využívající různé metody detekce poskytují alternativní metodu přesné kvantifikace proteinů z různých typů vzorků. Například multiplexní testy umožňují výzkumníkům kvantifikovat více proteinů ve vzorku současně. Kromě toho technologie počítání jednotlivých molekul může měřit femtogramové hladiny proteinů, což pomáhá identifikovat a kvantifikovat proteiny s nízkou hladinou v malých vzorcích. Výzkumné aplikace využívající tyto technologie zahrnují měření biomarkerů ve zdravých tkáních nebo těch, které souvisejí s progresí onemocnění, aby bylo možné lépe porozumět určitým chorobným stavům.