C9891

コラゲナーゼ Clostridium histolyticum由来

Type IA, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid, ≥125 CDU/mg solid, For general use

• 別名: クロストリジオペプチダーゼA
• CAS Number: 9001-12-1
• EC Number: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• EC Number: 232-582-9
• MDL番号: MFCD00130830
• UNSPSCコード: 12352204
• NACRES: NA.54

特性

• 品質水準: 200
• フォーム: essentially salt-free, lyophilized powder
• 比活性: ≥125 CDU/mg solid; 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid
• 分子量: 68-130 kDa
• テクニック: cell culture | mammalian: suitable; single cell analysis: suitable
• 溶解性: TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble
• アプリケーション: diagnostic assay manufacturing
• 輸送温度: wet ice
• 保管温度: −20°C

詳細

アプリケーション

また、本酵素は、ヒトの腫瘍、マウスの腎臓、ヒトの脳、および肺の上皮組織の脱凝集を目的に、その他のプロテアーゼとともに使用されています。これは、肝臓および腎臓灌流試験、膵臓の消化、非実質性のラット肝細胞および肝実質細胞の単離にも有用です。Sigmaの本酵素は、牛の海綿骨と皮質骨のI型コラーゲンの断片化に使用されています。B Streptococci（B群連鎖球菌）細胞に関するFALGPAアッセイのポジティブコントロールとしても使用されています。

シーケンス用シングルセル懸濁液の調製に適しています。

生物化学的／生理学的作用

コラゲナーゼは、モル酵素あたり 4 グラム原子カルシウムによって活性化されます。 本製品は、エチレングリコール-ビス(β-アミノエチルエーテル) - N, N, N′,N′-四酢酸、β-メルカプトエタノール、グルタチオン、チオグリコール酸、および 8-ヒドロキシキノリンによって阻害されます。

組織からの細胞の効果的な放出には、コラゲナーゼ酵素と中性プロテアーゼの両方の作用が必要です。コラゲナーゼは、1モルの酵素あたり4グラム原子のカルシウム（Ca²⁺）により活性化されます。培養ろ液には、68～130 kDaの分子量範囲の少なくとも7種の異なるプロテアーゼが含有されると考えられています。至適pHは6.3～8.8の範囲にあります。通常、本酵素は組織サンプル中の結合構成要素を消化して個々の細胞を遊離させるために使用されます。コラゲナーゼ処理で一部の細胞が死滅する場合もあります。通常、0.1～5 mg/mLの範囲にある濃度は、断片化に使用されます。反応時間は15分～数時間で、細胞死を起こし過ぎることなく満足のいく細胞解離効率が得られます。カルシウムとBSAを含有するKrebs Ringer緩衝液が好ましく、活性にはZn²⁺が必要です。本酵素は、配列-R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-を認識し、ほとんどの場合、Xは中性アミノ酸です。エチレングリコール-ビス(β-アミノエチルエーテル)-N,N,N',N'-四酢酸(EGTA)4; β-メルカプトエタノール; グルタチオン(還元型); チオグリコール酸、ナトリウム; 2,2'-ジピリジル; 8-ヒドロキシキノリン、システインは、酵素活性を阻害することが知られています。

注意

この製品は、納品後、-20℃で1年間安定です。37℃、50℃および-20℃で30日間、FALGPAまたはプロテアーゼ活性の低下はありません。粗コラゲナーゼの溶液は、アリコート（10 mg/mL）にして急速に凍結しても、-20℃で凍結保存しても安定です。さらに凍結融解サイクルを繰り返すと、溶液が損なわれます。 本産物は氷上に保持した場合、7時間にわたり100%の活性を維持します。

単位の定義

1 コラーゲン消化単位（CDU）は、ウシアキレス腱由来コラーゲンからペプチドを遊離し、カルシウムイオン存在下、pH 7.4、37°C、5 時間のニンヒドリン呈色における、1.0 umol のロイシンに相当します。1 FALGPA 加水分解単位は、25°Cで、1 分間あたりに、1.0 umol の furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala を加水分解します。1 中性プロテアーゼ単位は、pH 7.5、37°Cでカゼインを加水分解し、5 時間あたり1.0 umol のチロシンに相当する色を生成します。1 クロストリパイン単位は、DTT の存在下、pH 7.6、25°Cで、1 分間あたり　1.0 umol　の BAEE を加水分解します。

調製ノート

この産物は、Mandl, I., et al., J. Clin.の最初の40%硫酸アンモニウム分画に相当します。Invest., 32, 1323 (1953).通常、溶液は、50 mM TES、0.36 mM塩化カルシウムを含有するTESCA緩衝液を用いて1～2 mg/mL（37℃でpH 7.4）に調製されます。

安全性情報

• ピクトグラム: GHS08,GHS07
• シグナルワード: Danger
• 危険有害性情報: H315,H319,H334,H335
• 注意書き: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• 危険有害性の分類: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• ターゲットの組織: Respiratory system
• 保管分類コード: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 1
• 引火点(°F): Not applicable
• 引火点(℃): Not applicable
• 個人用保護具 (PPE): dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves