C2674

コラゲナーゼ Clostridium histolyticum由来

lyophilized powder, ≥125 CDU/mg solid (CDU = collagen digestion units), 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid

• 別名: クロストリジオペプチダーゼA
• CAS Number: 9001-12-1
• EC Number: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• EC Number: 232-582-9
• MDL番号: MFCD00130830
• UNSPSCコード: 12352204
• NACRES: NA.75

特性

• 由来生物: Clostridium histolyticum
• 品質水準: 200
• タイプ: Type I-A
• フォーム: lyophilized powder
• 比活性: ≥125 CDU/mg solid (CDU = collagen digestion units); 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid
• 分子量: 68-130 kDa
• 濃度: 1 mg/mL
• テクニック: cell culture | mammalian: suitable; single cell analysis: suitable
• pH: 6.3-8.8
• 輸送温度: ambient
• 保管温度: −20°C

詳細

詳細

コラゲナーゼは、コラーゲンと呼ばれる三重らせんタンパク質を切断するプロテアーゼです。3種類の組織コラゲナーゼがあり、これらはマトリックスメタロプロテアーゼ（MMP）ファミリーに属します。Clostridium histolyticumから得られるコラゲナーゼは、4～10℃という低温で両端からコラーゲンを消化する、非常に強い活性をもちます。粗コラゲナーゼ混合物には、コラゲナーゼとクロストリパインという2種類の主要酵素が含まれます。

アプリケーション

Clostridium histolyticum由来コラゲナーゼは以下の用途に使用されます：

• セルトリ細胞の分離
• 酵素法の比較
• 免疫細胞化学のための組織調製
• 精巣内精子の採取
• 単一細胞懸濁液の調製
• 免疫蛍光

本製品は、ヒト腫瘍、マウス腎、ヒト成人・胎児脳、肺、およびその他多くの上皮組織の脱凝集に適しています。 また、肝臓および腎臓の灌流実験、膵臓の消化、ラットの肝臓の非実質細胞の分離、ならびに肝細胞の調製においても効果的であることが示されています。 コラゲナーゼはまた、終端糖化産物の研究のための動脈組織の調製にも使用されています。 本酵素は、肝細胞の遊離のために約1mg/mLの濃度でテストされています。消化のための濃度範囲は0.1 ～ 5mg/mLです。

シーケンス用シングルセル懸濁液の調製に適しています。

生物化学的／生理学的作用

コラゲナーゼは、モル酵素あたり 4 グラム原子カルシウムによって活性化されます。 本製品は、エチレングリコール-ビス(β-アミノエチルエーテル) - N, N, N′,N′-四酢酸、β-メルカプトエタノール、グルタチオン、チオグリコール酸、および 8-ヒドロキシキノリンによって阻害されます。

コラゲナーゼ製品はC. histolyticumが分泌する酵素の混合物であり、分泌される酵素に存在する10～18種類の成分の相対比率によって、各製品は識別されます。 主成分は、2つのコラゲナーゼ、クロストリパイン、中性プロテアーゼです。 これらの酵素の相乗作用によって、コラーゲンやその他の細胞内物質が分解されます　組織から細胞を有効に放出するためには、両コラゲナーゼ酵素と中性プロテアーゼの作用が必要です。 様々な種類のコラーゲンが、コラゲナーゼの天然基質です。

注意

供給後、本製品は－20℃で1年間安定です。37℃、50℃、－20℃で30日以内にFALGPA又はプロテアーゼ活性の消失はありません。粗コラゲナーゼの溶液は、アリコートして（10 mg/mL）急速凍結し、－20℃で保存すると安定です。それ以上の凍結-融解サイクルは溶液に悪影響を及ぼします。 本製品は、氷冷保存で7時間、100％の活性を保ちます。

単位の定義

1 コラーゲン消化単位（CDU）は、ウシアキレス腱由来コラーゲンからペプチドを遊離し、カルシウムイオン存在下、pH 7.4、37°C、5 時間のニンヒドリン呈色における、1.0 umol のロイシンに相当します。1 FALGPA 加水分解単位は、25°Cで、1 分間あたりに、1.0 umol の furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala を加水分解します。1 中性プロテアーゼ単位は、pH 7.5、37°Cでカゼインを加水分解し、5 時間あたり1.0 umol のチロシンに相当する色を生成します。1 クロストリパイン単位は、DTT の存在下、pH 7.6、25°Cで、1 分間あたり　1.0 umol　の BAEE を加水分解します。

調製ノート

このコラゲナーゼは、Clostridium histolyticumの培養濾液から得られます。培養濾液には、分子量68～130 kDaの少なくとも7種類のプロテアーゼが含まれると考えられています。本製品はI-A型です。溶液は通常、TESCAバッファー（50 mM TES、0.36 mM塩化カルシウム含有、37℃でpH 7.4）中1～2 mg/mLで調製されます。

安全性情報

• ピクトグラム: GHS08,GHS07
• シグナルワード: Danger
• 危険有害性情報: H315,H319,H334,H335
• 注意書き: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• 危険有害性の分類: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• ターゲットの組織: Respiratory system
• 保管分類コード: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 1
• 引火点(°F): Not applicable
• 引火点(℃): Not applicable
• 個人用保護具 (PPE): dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves