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Roche
DIG RNAラベリングキット（SP6/T7）
sufficient for 2 x 10 labeling reactions, kit of 1 (12 components), suitable for hybridization, suitable for Southern blotting
別名:
DIGシステム, rna標識
使用法
sufficient for 2 x 10 labeling reactions
品質水準
包装
kit of 1 (12 components)
メーカー／製品名
Roche
環境により配慮した代替製品の特徴
Designing Safer Chemicals
Learn more about the Principles of Green Chemistry.
sustainability
Greener Alternative Product
テクニック
Northern blotting: suitable
Southern blotting: suitable
hybridization: suitable
環境により配慮した代替製品カテゴリ
, Aligned
保管温度
−20°C
詳細
アッセイ時間：145分
サンプル材料
DIG RNAラベリングキットは、DIG-標識された、既知の長さの一重鎖RNAプローブを生成します。SP6またはT7 RNAポリメラーゼのどちらも、テンプレートDNAからin vitroでこれらのプローブを転写します（ジゴキシゲニン-UTP存在下）。
in vitro転写によるRNAラベリング
転写されるDNAテンプレートは、SP6およびT7 RNAポリメラーゼのためのプロモーターを含む適切な転写ベクター（例、pSPT 18または19）のポリリンカーサイトに複製されます。隣接したテンプレートDNAが適切な場所で直線化され、RNAポリメラーゼが「ランオフ」転写物を生成します。DIG-UTPは転写物に取り込まれます。新たに合成されたRNAのすべての20～25番目のヌクレオチドが、DIG-UTPです。標準的な転写反応では、ヌクレオチド濃度は限界に達しないため、本反応は大量の標識化RNAを生成できます。
サンプル材料
- 直線化プラスミドDNA
- PCR生成物
DIG RNAラベリングキットは、DIG-標識された、既知の長さの一重鎖RNAプローブを生成します。SP6またはT7 RNAポリメラーゼのどちらも、テンプレートDNAからin vitroでこれらのプローブを転写します（ジゴキシゲニン-UTP存在下）。
in vitro転写によるRNAラベリング
転写されるDNAテンプレートは、SP6およびT7 RNAポリメラーゼのためのプロモーターを含む適切な転写ベクター（例、pSPT 18または19）のポリリンカーサイトに複製されます。隣接したテンプレートDNAが適切な場所で直線化され、RNAポリメラーゼが「ランオフ」転写物を生成します。DIG-UTPは転写物に取り込まれます。新たに合成されたRNAのすべての20～25番目のヌクレオチドが、DIG-UTPです。標準的な転写反応では、ヌクレオチド濃度は限界に達しないため、本反応は大量の標識化RNAを生成できます。
SP6およびT7 RNAポリメラーゼでのin vitro転写による、RNAのジゴキシゲニン-UTPラベリングのためのキット。この方法により、既知の長さの一重鎖RNAプローブが生成され、幅広いハイブリダイゼーションテクニックで使用できます。
メルクは、グリーン・ケミストリーの12原則の1つ以上に則った、より環境に配慮した製品（グリーン代替品）をお客様にお届けできるよう最善の努力をします。この製品はさらに安全な化学品として設計されます。 DIGシステムは、放射活性を用いて核酸の標識付けと検出を行う方法に対する、感度が高くコスト効率に優れた代替方法として確立されました。DIGシステムの多用途性を証明する多くの刊行物が入手できるため、放射標識を使用することは、ハイブリッド形成法用にDNAを標識する唯一のオプションではなくなりました。
特異性
感度および特異性
DIG標識化RNAプローブは、以下のアッセイ条件下で、わずか1 μgの哺乳類DNA中のシングルコピー遺伝子を検出できます。ハイブリダイゼーションミックスは、1 mLあたり20～100 ngの標識化プローブを含み、結合したプローブは、抗-DIG-APで検出され、化学発光基質のCDP-Starで可視化されます。
熱失活：2 μLの 0.2 M EDTA（pH 8.0）を添加して反応を停止します。
DIG標識化RNAプローブは、以下のアッセイ条件下で、わずか1 μgの哺乳類DNA中のシングルコピー遺伝子を検出できます。ハイブリダイゼーションミックスは、1 mLあたり20～100 ngの標識化プローブを含み、結合したプローブは、抗-DIG-APで検出され、化学発光基質のCDP-Starで可視化されます。
熱失活：2 μLの 0.2 M EDTA（pH 8.0）を添加して反応を停止します。
アプリケーション
SP6およびT7 RNAポリメラーゼでのin vitro転写による、RNAのDIG-11-UTPラベリング。DIG標識され「ランオフ」された転写物が高い効率で合成され、以下のような幅広いハイブリダイゼーションテクニックで使用できます：
注意：DIGとUTPの結合はアルカリに耐性があるため、DIG標識化RNAはアルカリ処理による断片化に使用できます。DIG標識化RNAプローブのサイズをわずかに小さくしたものは、in situハイブリダイゼーションにおける特定のアプリケーションにより適しています。
- ノーザンブロット
- サザンブロット
- In situハイブリダイゼーション
- プラークまたはコロニーリフト
- RNアーゼプロテクション実験
注意：DIGとUTPの結合はアルカリに耐性があるため、DIG標識化RNAはアルカリ処理による断片化に使用できます。DIG標識化RNAプローブのサイズをわずかに小さくしたものは、in situハイブリダイゼーションにおける特定のアプリケーションにより適しています。
包装
1つのキットには12のコンポーネントが含まれています。
品質
原理：転写されるDNAテンプレートが、SP6および/またはT7 RNAポリメラーゼのためのプロモーターを含む適切な転写ベクターのポリリンカーサイトに複製されます。適切な部位における直線化の後、DIG-UTPの存在下でRNAが転写されます。標準的な条件下では、約10 μgのDIG標識化完全長RNAが、1 μgのテンプレートから転写されます。
その他情報
ライフサイエンス研究のみに使用できます。診断には使用できません。
キットの構成要素のみ
製品番号
詳細
- pSPT18 DNA 0.25 mg/ml
- pSPT19 DNA 0.25 mg/ml
- Control DNA 1, pSPT18-Neo, cleaved with Pvu II 0.25 mg/ml
- Control DNA 2, pSPT19-Neo, cleaved with Pvu II 0.25 mg/ml
- DIG-labeled Control RNA, DIG-labeled "antisense" neo RNA 100 ng/µl
- Unlabeled Control RNA, neo poly (A) "sense" RNA 200 µg/ml
- NTP Labeling Mixture 10x concentrated
- Transcription Buffer 10x concentrated
- DNase I, RNase-free 10 U/µl
- Protector RNase Inhibitor 20 U/µl
- SP6 RNA Polymerase 20 U/µl
- T7 RNA Polymerase 20 U/µl
すべて表示 (12)
シグナルワード
Warning
危険有害性情報
危険有害性の分類
Acute Tox. 4 Oral - Eye Irrit. 2 - Skin Sens. 1
保管分類コード
12 - Non Combustible Liquids
WGK
WGK 2
引火点(°F)
does not flash
引火点(℃)
does not flash