Protein G a protein A se vážou na různé IgG

Vysoká afinita proteinů G a A k Fc oblasti polyklonálních a monoklonálních protilátek typu IgG je základem pro purifikaci IgG, fragmentů IgG obsahujících Fc oblast a podtříd IgG.

Protein G a protein A jsou bakteriální proteiny ze skupiny G Streptococci a Staphylococcus aureus. Po spojení se sefarosou vytvářejí protein G a protein A mimořádně užitečná, snadno použitelná chromatografická média pro rutinní purifikaci protilátek. Příklady zahrnují purifikaci monoklonálních protilátek typu IgG, purifikaci polyklonálních IgG a jejich podtříd, adsorpci a purifikaci imunitních komplexů zahrnujících IgG a fúzních proteinů. Podtřídy IgG lze izolovat ze supernatantů buněčných kultur, séra a ascitu.

Tabulka 1 ukazuje srovnání relativní vazebné síly proteinu G a proteinu A na různé imunoglobuliny. Informace byly sestaveny z různých publikací. Vazebné síly jsou testovány s volným proteinem G nebo proteinem A a lze je použít jako vodítko pro předpověď vazebného chování na purifikačním médiu proteinu G nebo proteinu A. Při spojení s afinitní matricí se však interakce může změnit. Například krysí IgG1 se váže na protein G sepharose, ale ne na protein A sepharose.

Jednokrokové čištění vzorků z nativních zdrojů nebo z média doplněného telecím sérem na základě specifity Fc oblasti spoluurčuje hostitelský IgG a může vázat i stopová množství sérových proteinů. Chcete-li se vyhnout stopovým množstvím kontaminujícího IgG, zvažte alternativní techniky, jako je imunospecifická afinita s použitím protilátek proti hostitelskému IgG ve spojení například s NHS-aktivovanou sefarozou, iontově výměnná chromatografie (IEX) například s Capto™ adhere nebo hydrofobní interakční chromatografie.

* Purifikováno pomocí HiTrap IgM Purification HP kolonek.
^† Purifikováno pomocí HiTrap IgY Purification HP kolonek.
++++ = silná vazba.
++ = střední vazba.
- = slabá nebo žádná vazba.