Výroba a formulace mRNA

mPracovní postup výroby mRNA

Použití technologie mRNA k revolučnímu způsobu léčby a prevence nemocí závisí na robustních a konzistentních procesech výroby mRNA a její následné purifikace a formulace. Úspěch vyžaduje použití vysoce kvalitních produktů s vynikajícím výkonem a služeb poskytovaných odborníky s rozsáhlými zkušenostmi a prokazatelnými úspěchy v této rozvíjející se oblasti.

Naše šablona pro výrobu mRNA poskytuje robustní pracovní postup, zatímco naše výrobní procesy LNP zajišťují vysoce kvalitní a konzistentní dodávky.

Služby vývoje a výroby mRNA

Naše integrované schopnosti zahrnují vývoj a výrobu funkčních mRNA, syntetických dlouhých RNA a DNA a také nabídku produktů technologie mRNA, jako je izolace RNA a soupravy pro amplifikaci mRNA. Snažíme se o přímou a flexibilní interakci se zákazníky z odvětví přírodních věd a akademických výzkumných institucí po celém světě, včetně technické podpory na místě. Díky našemu osvědčenému pracovnímu postupu je výroba mRNA vysoce reprodukovatelná a konečný produkt má vynikající aktivitu. Mezi klíčové vlastnosti naší nabídky patří:

• Výroba plně přizpůsobitelných sekvencí až do 13 000 nukleotidů
• Výrazně nižší nároky (~10 000x) na plazmidovou DNA ve srovnání se standardními postupy výroby mRNA
• Vysoce reprodukovatelný proces poskytující mRNA s homogenním poly A ocasem a vysoce výkonným produktem

Produkty a služby pro výrobu mRNA

• Výroba šablony plazmidové DNA (pDNA)
• Linearizace pDNA pomocí enzymu s unikátním restrikčním místem
• Výrobu šablony plazmidové/li>
• Odstranění restrikčního enzymu, BSA, fragmentů DNA, endotoxinů a dalších nečistot pomocí tangenciální průtokové filtrace (TFF) a chromatografie 
• Přepis linearizace pDNA do mRNA pomocí bakteriofágové RNA polymerázy
• Přidání struktury 5' uzávěru k mRNA pro zajištění stability a účinné transdukce v buňce

mPurifikace mRNA

Po in vitro transkripci se mRNA očistí od nečistot a materiálů použitých v předchozích krocích, včetně endotoxinů, imunogenní dvouvláknové RNA (dsRNA), zbytků templátu DNA, RNA polymerázy a elementárních nečistot. Pro purifikaci mRNA je k dispozici několik možností.

Produkty a služby pro purifikaci mRNA

• Tangenciální průtoková filtrace (TFF) zajišťuje účinnou separaci od malých nečistot, které nezachytí membrána. Na základě velikosti mRNA lze použít mezní molekulové hmotnosti v rozmezí 30 až 300 kDa. Pomocí TFF je možné purifikovat, koncentrovat a diafiltrovat produkt v rámci jedné operace.
• Může být použito několik chromatografických technik, včetně iontového páru na reverzní fázi, aniontové výměny a afinitní chromatografie s použitím záchytu poly(dT). Chromatografie se používá po enzymatickém zachycení k odstranění nežádoucích produktů a oligonukleotidových nečistot
• K maximalizaci čistoty produktu a převodu mRNA do vhodných pufrů pro formulaci nebo skladování se provádí závěrečný krok koncentrace a diafiltrace. V této fázi může být mRNA dále čištěna, koncentrována a diafiltrována v rámci stejné jednotkové operace.

 mFormulování mRNA

Nahá mRNA je nestabilní a pro doručení mRNA do cílových buněk jsou nezbytné systémy pro doručení léčiv, jako jsou lipidové nanočástice (LNP). Kvalita surovin použitých k syntéze lipidů, stejně jako typ a zdroj lipidů mají přímý vliv na profil nečistot, vlastnosti částic, stabilitu částic a profil uvolňování konečného přípravku. Nabízíme celou řadu vlastních a portfoliových lipidů pro návrh nejvhodnějšího LNP pro vaši aplikaci mRNA.

mOchrana mRNA

Produkce stabilní mRNA vyžaduje robustní proces a použití chemikálií a surovin, které minimalizují riziko degradace aktivitou RNAse nebo mikrobiální kontaminací. Pro ochranu mRNA během výroby, purifikace a formulace jsou naše vysoce kvalitní suroviny Emprove^® Expert testovány na endonukleázovou aktivitu a mají nízké hladiny bioburden a endotoxinů. Naše suroviny rovněž splňují požadavky IPEC-PQG GMP.