DomůAplikaceBuněčné kultury a analýza buněčných kulturBuněčné kultury podle technikyTransfekce a editace genů
Transfekce a editace genů
Transfekce je proces vnášení nukleových kyselin do eukaryotických buněk. Buňky mohou být stabilně transfekovány pro integraci DNA do jejich genomu nebo transientně transfekovány pro dočasnou expresi proteinů. K transfekci buněk se používají chemické, fyzikální a biologické metody, které umožňují studovat funkci a expresi genů v buněčném prostředí. Mezi aplikace patří genová terapie, tvorba indukovaných pluripotentních kmenových buněk (iPSC), umlčování genů pomocí interference RNA (RNAi) a výroba terapeutických protilátek a proteinů.
Související technické články
- Transfekcí se do buněk zavádí genetický materiál, což napomáhá výzkumu v oblasti genové exprese a buněčné biologie.
- Browse our convenient transfection reagent selection guide to match the best reagent for your specific cell line and application needs.
- Automation is used for many applications to reduce variation caused by manual handling and to obtain reproducible results in high-throughput assays. High-throughput applications, such as knockdown studies or target screenings, often include cell transfection.
- Malé inhibiční RNA umožňují snadné snížení exprese genů v savčích buňkách, což přináší revoluci ve výzkumu genů.
- Získejte tipy pro manipulaci s lentivirovými viry, optimalizaci nastavení experimentu, titraci lentivirových částic a výběr užitečných produktů pro transdukci.
- Zobrazit vše (27)
Související protokoly
- Univerzální transfekční činidlo umožňuje efektivní přenos nukleových kyselin do různých buněk, kompatibilní s různými podmínkami buněčné kultivace.
- Protokoly pro transfekci běžných buněčných linií pomocí transfekčních činidel X-tremeGENE™
- Cell preparation for transfection Plate cells approx. 24 hours before transfection making sure cells are at optimal concentration (70 – 90 % confluency).
- Calcium Phosphate Transfection Kit Protocol
- Příprava lipidových vezikul zahrnuje hydratační a velikostní kroky, které jsou použitelné bez ohledu na složení lipidů.
- Zobrazit vše (29)
Další články a protokoly
Obvyklé metody transfekce
- Lipidy a liposomy: Kationtové lipidy vytvářejí liposomy obsahující DNA nebo RNA pro přenos. Tyto lipozomy se spojí s buněčnou membránou a uvolní nukleovou kyselinu do buňky.
- Fosforečnan vápenatý: Fosforečnan vápenatý usnadňuje vazbu DNA na povrch buňky, což umožňuje vstup genetického materiálu do buňky endocytózou.
- Kationtové polymery: Při transfekci na bázi polymerů vytváří exogenní DNA komplexy s kationtovými polymery, jako je polyethylenimin (PEI), které vstupují do hostitelských buněk endocytózou.
- Lenvirová transdukce: Buňky jsou infikovány modifikovanými lentivirovými vektory, které převádějí svou virovou RNA na dvouvláknovou DNA pro integraci do genomu hostitele za účelem doručení.
- Mikroinjekce: Cílové buňky se nejprve umístí pod mikroskop. Nukleová kyselina je poté vstříknuta přímo do cytoplazmy nebo jádra pomocí tenké skleněné kapilární jehly.
- Elektroporace: Buňky jsou vystaveny elektrickému proudu o vysoké intenzitě, který destabilizuje membrány a zvyšuje jejich propustnost pro přenos genu.
Transfekce se rutinně používá v technikách editace genů a umlčování genů, které zlepšily naše chápání složitých biologických procesů a umožnily využití genové terapie k léčbě onemocnění.
- Systémy CRISPR-Cas využívají bakteriální obranný mechanismus, který používá genetické CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) ve spojení s endonukleázami Cas (CRISPR-associated) k řezání genomové DNA na cílových místech a odstraňování nebo nahrazování genů in vivo.
- Inženýrské nukleázy se zinkovými prsty (ZFN) jsou sestaveny z vazebných domén DNA a endonukleáz a štěpí DNA na cílových místech za účelem editace genů.
- RNAi činidla, jako jsou krátké vlásenkové RNA (shRNA) a malé interferující RNA (siRNA), omezují hladiny genových transkriptů pro umlčení genů buď potlačením transkripce, nebo aktivací sekvenčně specifických procesů degradace RNA.
Chcete-li pokračovat, musíte se přihlásit.
Abyste mohli pokračovat ve čtení, přihlaste se nebo vytvořte účet.
Nemáte účet?