qPCR
Quantitative Real-Time PCR (qPCR) wykorzystuje fluorescencyjne cząsteczki reporterowe, aby umożliwić kwantyfikację amplifikowanych produktów. Podobnie jak w konwencjonalnym PCR, matryca DNA, cDNA lub RNA jest amplifikowana, ale w każdym cyklu sygnały fluorescencyjne są monitorowane w celu względnej lub bezwzględnej kwantyfikacji.
Ta technika jest przydatna w wielu obszarach badań, w tym w analizie ekspresji genów, genotypowaniu, analizie mikroRNA, analizie zmienności genetycznej i analizie białek.
Nagrodzone kategorie
Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) jest podstawą w laboratoriach biologii molekularnej. PCR służy do amplifikacji DNA o kilka rzędów wielkości, a nasze odczynniki i zasoby są odpowiednie dla wielu procesów badawczych, w tym analizy ekspresji genów, genotypowania, sekwencjonowania i mutagenezy.
Metody klonowania molekularnego i ekspresji białek oraz protokoły niezawodnego klonowania i silnej ekspresji białek z wektorów ekspresji białek owadów, bakterii i ssaków.
Odczynniki epigenetyczne i zasoby do badania gatunków RNA, metylacji DNA, modyfikacji chromatyny i modyfikacji histonów.
Jak analizować dane qPCR
Fluorescencja cząsteczek reporterowych jest mierzona i określana ilościowo; zazwyczaj są to albo barwniki (np.SYBR® Green, Ethidium Bromide), które interkalują między zasadami w dwuniciowym DNA, lub sondy zaprojektowane do wiązania określonej sekwencji (np.Molecular Beacons, TaqMan® probes) na DNA.
Relative Quantitation of qPCR Data
Istnieją dwie główne metody kwantyfikacji danych qPCR. Względna kwantyfikacja, bardziej powszechna metoda, wykorzystuje informacje ΔΔCt, za pomocą których określa się stosunek ekspresji lub liczebności genu docelowego w próbce, porównuje się go z genem kontrolnym i normalizuje ze stosunkiem ekspresji genu referencyjnego. Ponieważ wartości wydajności E dla genów docelowych i referencyjnych różnią się, metoda ta uwzględnia również różnice w wartościach E. Metoda ta jest częściej stosowana w analizie ekspresji genów.
Absolute Quantitation of qPCR Data
Druga metoda, absolutna kwantyfikacja, jest bardziej powszechna w mikrobiologii środowiskowej i wykorzystuje krzywą standardową (SC). Metoda SC wykorzystuje serie rozcieńczeń o znanym stężeniu matrycy, N0, w celu utworzenia krzywej standardowej przy użyciu regresji liniowej log(N0) względem CT (cykl progowy). Jest ona następnie wykorzystywana do obliczenia stężenia matrycy w próbce. Podstawą tej metody jest to, że wartość wydajności próbki jest taka sama jak wartość standardu.
Szukasz bardziej szczegółowych informacji?
Odwiedź naszą wyszukiwarkę dokumentów, aby znaleźć arkusze danych, certyfikaty i dokumentację techniczną.
Powiązane artykuły
- Po zakończeniu tradycyjnego PCR, analiza danych PCR/qPCR jest przeprowadzana przez rozdzielczość w żelu agarozowym lub, ostatnio, przez kapilarę.
- Reakcja łańcuchowa polimerazy w czasie rzeczywistym pozwala badaczom oszacować ilość materiału wyjściowego w próbce. Ma znacznie szerszy zakres dynamiczny analizy niż konwencjonalna PCR
- Przewodnik po teście PCR prowadzi przez walidację starterów i inne czynniki optymalizacji testu, aby zapewnić wysoką czułość i specyficzność dla optymalnej kwantyfikacji DNA / RNA.
- Na zmienność przepływu pracy PCR wpływa źródło próbki, odwrotna transkrypcja i projekt testu, wpływając na odtwarzalność.
- Celem Hot Start PCR jest zahamowanie reakcji PCR w celu zmniejszenia niespecyficznej amplifikacji, zapobiegania tworzeniu się dimerów starterów i zwiększenia wydajności produktu.
- Zobacz wszystkie (57)
Powiązane protokoły
- Nasz protokół SYBR Green qPCR to metoda zaprojektowana do dokładnego wykrywania ilościowego ekspresji genów i reakcji RT-PCR
- Immunoprecypitacja chromatyny qPCR do badania regulacji genów w różnych warunkach.
- Protokół optymalizacji stężenia starterów tworzy matrycę reakcji do testowania stężeń starterów względem różnych partnerów.
- Optymalizacja warunków qPCR jest ważna dla opracowania solidnego testu. Dwa główne podejścia to optymalizacja stężenia starterów i/lub temperatury annealingu.
- Multiplex qPCR wykorzystujący chemię opartą na sondach jest wymagającą aplikacją, która często wymaga szerokiej optymalizacji i walidacji.
- Zobacz wszystkie (42)
Znajdź więcej artykułów i protokołów
Jak możemy pomóc
W przypadku jakichkolwiek pytań, prosimy o przesłanie prośby o wsparcie klienta
lub rozmowę z naszym zespołem obsługi klienta:
Email custserv@sial.com
lub zadzwoń +1 (800) 244-1173
Dodatkowe wsparcie
- Kalkulatory i aplikacje
Web Toolbox - narzędzia naukowe i zasoby dla chemii analitycznej, nauk przyrodniczych, syntezy chemicznej i materiałoznawstwa.
- Customer Support Request
Obsługa klienta, w tym pomoc przy zamówieniach, produktach, kontach i kwestiach technicznych związanych z witryną.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?