C2674

Collagenasi

lyophilized powder, ≥125 CDU/mg solid (CDU = collagen digestion units), 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid

• Sinonimo/i: Clostridiopeptidasi A
• CAS Number: 9001-12-1
• Numero CE: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• Numero CE: 232-582-9
• Numero MDL: MFCD00130830
• Codice UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.75

Proprietà

• Origine biologica: Clostridium histolyticum
• Livello qualitativo: 200
• Tipo: Type I-A
• Stato: lyophilized powder
• Attività specifica: ≥125 CDU/mg solid (CDU = collagen digestion units); 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid
• PM: 68-130 kDa
• Concentrazione: 1 mg/mL
• tecniche: cell culture | mammalian: suitable; single cell analysis: suitable
• pH: 6.3-8.8
• Condizioni di spedizione: ambient
• Temperatura di conservazione: −20°C

Descrizione

Descrizione generale

La collagenasi è una proteasi che scinde la proteina a tripla elica chiamata collagene. Esistono tre tipi di collagenasi tissutali; appartengono alla famiglia delle metalloproteinasi della matrice (MMP). La collagenasi ottenuta da Clostridium histolyticum ha un′attività molto intensa e digerisce il collagene da entrambe le estremità, a basse temperature fino a 4-10 °C. Le miscele di collagenasi grezza contengono due tipi principali di enzimi, vale a dire la collagenasi e la clostripaina.

Applicazioni

La collagenasi ottenuta da Clostridium histolyticum è stata usata nelle seguenti applicazioni:

• isolamento delle cellule del Sertoli;
• confronto tra metodi enzimatici;
• preparazione di tessuti da sottoporre a immunocitochimica;
• estrazione di liquido seminale da testicoli;
• preparazione di sospensioni di cellule singole;
• immunofluorescenza

Questo prodotto è adatto per disaggregare tumori umani, tessuto renale di topo, tessuto cerebrale umano fetale e adulto, polmone e molti altri tessuti epiteliali. Si è dimostrato efficace anche in studi di perfusione epatica e renale, nella digestione del pancreas, nell′isolamento di cellule epatiche non parenchimali di ratto e nella preparazione di epatociti. La collagenasi è stata usata anche nella preparazione di tessuto arterioso per lo studio dei prodotti finali della glicosilazione avanzata. Questo enzima è stato esaminato ai fini del rilascio di epatociti a una concentrazione di circa 1 mg/mL. Le concentrazioni per la digestione variano da 0,1 a 5 mg/mL.

Idoneo per l′impiego nella preparazione di sospensioni di cellule singole per successivo sequenziamento.

Azioni biochim/fisiol

Il prodotto a base di collagenasi è una miscela di enzimi secreti da C. histolyticum e i diversi prodotti si differenziano in base ai rispettivi rapporti tra i 10-18 componenti presenti negli enzimi secreti. I componenti principali sono due collagenasi, la clostripaina e una proteasi neutra. L′azione sinergica di questi enzimi degrada il collagene e altro materiale intracellulare. Per un′efficace liberazione delle cellule dal tessuto è necessaria l′azione di entrambe le collagenasi e della proteasi neutra. Diversi tipi di collagene costituiscono i substrati naturali della collagenasi.

La collagenasi è attivata da quattro grammi atomo di calcio per mole di enzima. È inibita da etilen-glicol-bis(beta-amminoetil etere) - acido N, N, N′,N′-tetraacetico, beta-mercaptoetanolo, glutatione, acido tioglicolico e 8-idrossichinolina.

Avvertenza

Questo prodotto come fornito è stabile per un anno a -20 °C. Non c′è perdita in FALGPA o nell′attività della proteasi in 30 giorni a 37 °C, 50 °C e -20 °C. Soluzioni di collagenasi grezza sono stabili se congelate rapidamente in aliquote (a 10 mg/mL) e mantenute congelate a -20 °C. Ulteriori cicli di congelamento-scongelamento danneggerebbero la soluzione. Il prodotto tenuto in ghiaccio conserva il 100% di attività per 7 ore.

Definizione di unità

Una unità di digestione del collagene (CDU) libera peptidi da collagene proveniente da tendine d′Achille bovino equivalente in colore ninidrina a 1,0 μmole di leucina in 5 ore a pH 7,4 a 37 °C in presenza di ioni calcio. Una unità di idrolisi FALGPA idrolizza 1,0 μmole di furilacriloil-Leu-Gly-Pro-Ala per minuto a 25 °C. Una unità di proteasi neutra idrolizza caseina e produce colore equivalente a 1,0 μmole di tirosina per 5 ore a pH 7,5 a 37 °C. Una unità di clostripaina idrolizza 1,0 μmole of BAEE per minuto a pH 7,6 a 25 °C in presenza di DTT.

Nota sulla preparazione

Questa collagenasi è ottenuta filtrando la coltura di Clostridium histolyticum. Si ritiene che il filtrato della coltura contenga almeno 7 diverse proteasi con pesi molecolari compresi fra 68 e 130 kDa. Il prodotto appartiene al Tipo I-A. Solitamente le soluzioni si preparano a concentrazioni di 1-2 mg/mL in tampone TESCA, con 50 mM TES, 0,36 mM cloruro di calcio, pH 7,4 a 37 °C.

Informazioni sulla sicurezza

• Pittogrammi: GHS08,GHS07
• Avvertenze: Danger
• Indicazioni di pericolo: H315,H319,H334,H335
• Consigli di prudenza: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classi di pericolo: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Organi bersaglio: Respiratory system
• Codice della classe di stoccaggio: 11 - Combustible Solids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1
• Punto d’infiammabilità (°F): Not applicable
• Punto d’infiammabilità (°C): Not applicable
• Dispositivi di protezione individuale: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves