Primární lidské fibroblasty a růstová média

Tyto produkty jsou dostupné v USA, Kanadě a vybraných evropských zemích.

• Systém pro kultivaci primárních lidských fibroblastů
• Kontrola kvality primárních lidských fibroblastů a růstových médií
• Primární lidské fibroblastové buňky
• Růstová média fibroblastů
• Média pro růst fibroblastů 2
• Média pro růst fibroblastů 3
• Materiály pro primární kultury lidských fibroblastů

Systém pro kultivaci primárních lidských fibroblastů

Konektivní tkáň je odvozena z mezodermu a má zásadní význam pro zachování strukturální integrity těla. Fibroblasty, převládající buňky vyskytující se v pojivové tkáni, nepřetržitě vylučují různé složky extracelulární matrix. Fibroblasty vykazují jedinečnou morfologii a funkční vlastnosti, které závisí na místě jejich původu a fyziologickém stavu.

Primární lidské fibroblasty PromoCell jsou izolovány z normální lidské juvenilní předkožky nebo z dospělé kůže z různých míst, včetně dospělé plicní tkáně a aortální adventiciální tkáně. Brzy po izolaci jsou lidské fibroblasty kryokonzervovány v pasáži 2 (P2) pomocí patentovaného mrazicího média bez séra, Cryo-SFM. Každá rozmražená kryovialka obsahuje nejméně 500 000 životaschopných buněk. Lidské fibroblasty jsou k dispozici také jako proliferující buněčné kultury vyrobené z kryokonzervovaných buněk, které byly rozmraženy a kultivovány po dobu tří dnů.

• Protokol kultivace primárních lidských fibroblastů

Médium pro růst fibroblastů je k dispozici ve třech různých složeních:

• Médium pro růst fibroblastů je složení pro růst fibroblastů.nbsp;bezsérové médium vyvinuté pro in vitro kultivaci fibroblastů. Toto médium je optimalizováno pro primární lidské buňky, ale lze jej použít i pro hovězí, prasečí a potkaní fibroblasty a také pro fibroblastové buněčné linie.
• Médium pro růst fibroblastů 2 je prostředek pro růst fibroblastů.médium s nízkým obsahem séra vyvinuté pro in vitro kultivaci dospělých lidských fibroblastů. Médium je optimalizováno pro primární lidské buňky, ale lze jej použít i pro hovězí, prasečí a potkaní fibroblasty a také pro fibroblastové buněčné linie.
• Médium pro růst fibroblastů 3 bylo vyvinuto speciálně pro .nbsp;in vitro kultivaci dospělých lidských srdečních fibroblastů (HCF).

Všechny přípravky pro růst fibroblastů jsou k dispozici ve dvou variantách: Médium (připravené k použití) a sada médií. Varianta Médium (připravené k použití) obsahuje 500 ml lahvičku základního média a jednu lahvičku SupplementMix. Sada Medium Kit obsahuje 500 ml lahvičku bazálního média a SupplementPack, což je sada jednotlivých lahviček s předem odměřenými doplňky, která dává uživateli plnou kontrolu nad složením média. Přidáním směsi SupplementMix nebo balení SupplementPack k základnímu médiu vznikne kompletní médium pro růst fibroblastů. Základní médium pro fibroblasty (s fenolovou červení nebo bez ní), SupplementMix a SupplementPack lze zakoupit také samostatně.

Doporučené složení médií pro konkrétní typy primárních fibroblastů
Buněk

Podrobnosti o doplnění růstového média pro lidské fibroblasty

Růstové médium pro fibroblasty obsahuje všechny složky nezbytné pro optimální růst lidských fibroblastů (podrobnosti viz tabulka níže). Médium pro růst fibroblastů neobsahuje antibiotika ani antimykotika a je určeno pro použití v inkubátoru s 5% obsahem atmosférického CO₂.

Koncentrace doplňků média pro růst fibroblastů
(po přidání do média)

.

Příprava doplňkových médií pro lidské fibroblasty

• Směs doplňkových médií pro růst fibroblastů nebo balení doplňkových médií rozmrazte při teplotě 15-25 °C.
• Asepticky promíchejte roztoky doplňků jemným pipetováním nahoru a dolů.
• Přeneste celý obsah každého doplňku do základního média pro fibroblasty.
• Lahvičku uzavřete a jemně ji promíchejte, abyste dosáhli homogenní směsi.

Skladování a stabilita primárních lidských fibroblastů a růstových médií

• Po příchodu ihned skladujte Základní médium pro fibroblasty ve tmě při teplotě 4 - 8 °C; nemrazte. Fibroblast Growth Medium SupplementMix nebo SupplementPack skladujte při -20 °C.
• Při správném skladování jsou produkty stabilní až do data použitelnosti uvedeného na etiketě.
• Po přidání doplňků k Fibroblast Basal Medium je doba použitelnosti celého média šest týdnů při teplotě 4 - 8 °C. Kompletní médium pro růst fibroblastů nezmrazujte.
• Pro použití předehřejte pouze požadovanou alikvotní část kompletního média pro růst fibroblastů a zbývající médium uchovávejte v chladu při teplotě 4 - 8 °C.
• Po příjezdu uchovávejte kryokonzervované buňky v tekutém dusíku nebo přímo vysévat.
• Proliferující buňky musí být zpracováno okamžitě.

Kontrola kvality primárních lidských fibroblastů a růstových médií

Kontrola kvality primárních lidských fibroblastů a růstových médiíKontrola kvality lidských fibroblastů

Následující testy přísné kontroly kvality se provádějí u každé šarže lidských fibroblastů:

• Testování morfologie buněk, míry adherence a životaschopnosti buněk
• Průtokové cytometrické analýzy fibroblastově specifického antigenu CD90
• Testování růstové výkonnosti prostřednictvím vícenásobných pasáží až do 10 nebo 15 zdvojení populace (PD) za kultivačních podmínek bez antibiotik a antimykotik (viz tabulka níže).
• Testování na nepřítomnost HIV-1, HIV-2, HBV, HCV, HTLV-1, HTLV-2 a mikrobiálních kontaminantů (plísní, bakterií a mykoplazmy)
• Podrobný certifikát analýzy (CoA) pro každou šarži je k dispozici ke stažení.

*katalogová čísla v této tabulce se týkají médií v baleních připravených k použití

Kontrola kvality růstových médií pro fibroblasty

Všechny šarže růstových médií pro fibroblasty jsou podrobeny komplexnímu testování kvality. Tyto testy kontrolují aktivitu podporující růst, míru adherence a typickou morfologii primárních lidských fibroblastů. Jako reference se používají schválené interní šarže médií. Mikrobiologické testování navíc zajišťuje, že všechny šarže Fibroblast Growth Media neobsahují kontaminanty (plísně, bakterie, mykoplazmy).

Předpokládané použití primárních lidských fibroblastů a růstových médií

Primární lidské fibroblasty a růstová média jsou určeny pouze pro in vitro použití, nikoli pro diagnostické nebo terapeutické postupy. Informace o bezpečnosti naleznete v příslušném bezpečnostním listu.

Poznámka: Média PromoCell mají nízký nebo nulový obsah séra a nejsou vhodná pro trypsinovou neutralizaci (například při subkultivaci buněk). Místo toho doporučujeme použít sadu DetachKit (C-41200, .C-41210, C-41220), která obsahuje HEPES BSS, Trypsin/EDTA a Trypsin Neutralizační roztok.

Materiály pro kultivaci primárních lidských fibroblastů