Příprava médií

Příprava médií

Komerční kultivační média jsou dodávána v dehydratované nebo práškové formě, v tekutém koncentrátu nebo jako pracovní roztoky. Dehydratovaná média pro bujónové kultury je třeba připravit rozpuštěním v destilované vodě a úpravou konečného pH před sterilizací. Prášková média pro agarové kultury se musí rozpustit v destilované vodě, rozmíchat a poté převařit nebo autoklávovat před nasypáním do sterilních Petriho misek za použití aseptických technik. Kultivační média dodávaná jako tekuté koncentráty musí být asepticky zředěna v destilované vodě, upravena na pH a rozdělena do sterilních nádob určených ke skladování. Kultivační média dodávaná jako pracovní roztoky jsou připravena k použití po přidání požadovaného séra nebo jiných doplňků za sterilní filtrace a/nebo aseptických podmínek a zahřátí na teplotu vhodnou pro růst buněk.

Sterilizace kultivačních médií

Kultivační média připravená z prášků musí být před použitím sterilizována filtrací, zahřátím nebo autoklávováním. Ačkoli jsou tekutá média často dodávána sterilní a v koncentraci připravené k použití, doporučuje se sterilní filtrace, zejména pokud se mají před použitím přidávat séra nebo jiné doplňky. Po sterilizaci je třeba při manipulaci s kultivačními médii používat aseptické techniky, aby se zabránilo křížové kontaminaci nebo růstu nežádoucích mikroorganismů.

Doplňky kultivačních médií

Některé doplňky potřebné pro kultivaci nebo regulaci buněk jsou nestabilní nebo tepelně labilní, proto je musí uživatel před použitím přidat do tepelně sterilizovaného základního kultivačního média. Sérum obvykle pocházející z hovězích zdrojů (FBS) je běžným doplňkem používaným v médiích pro kultivaci živočišných buněk. Pro růst určitých typů buněk mohou být vyžadovány hormony, růstové faktory a specifické signální molekuly. Přídatné látky, jako je IPTG, se používají k indukci exprese proteinů. Do kultivačních médií mohou být také přidávána antibiotika pro kontrolu růstu bakteriálních a plísňových kontaminantů, ačkoli kontaminaci lze dobře kontrolovat vhodnou manipulací a skladováním médií.

Skladování a použití kultivačních médií

Komerční a připravená kultivační média v kapalné formě, ve formě nalitého agaru nebo pracovních roztoků se obvykle skladují při teplotě 4 °C ve tmě, aby se potlačil růst oportunních mikroorganismů a zabránilo se degradaci složek kultivačních médií způsobené světlem. Před očkováním kulturami by se média měla zahřát na teplotu vhodnou pro růst buněk.