Préparation des milieux de culture microbiologique

Types de milieux de culture

Les milieux de culture microbiologique doivent fournir des conditions de croissance optimales pour tous les types de micro-organismes ou pour certains types spécifiques. La composition précise du milieu dépend de l'espèce qui est mise en culture et de l'objectif de l'application. Le pH du milieu doit être ajusté en fonction des micro-organismes. Les milieux de culture microbiologique sont classés sur la base de plusieurs paramètres, tels que leurs constituants chimiques, leur nature physique et leur fonction. Les types de milieux définis par ces paramètres sont présentés ci-dessous.

Classification des milieux de culture microbiologique par leur composition chimique

Le milieu de synthèse (défini) est un milieu ayant une composition chimique définie, couramment utilisé pour la culture des photoautotrophes, tels que les cyanobactéries et les protistes photosynthétiques. Il est largement utilisé en recherche, pour étudier le métabolisme des micro-organismes.

Le milieu complexe est un milieu contenant des composants chimiques non définis, tels que de la peptone, de l'extrait de viande et de l'extrait de levure, qui répondent aux besoins nutritifs de différents micro-organismes. Il est utilisé pour la culture des microbes délicats avec des besoins nutritionnels complexes.

Classification des milieux de culture microbiologique sur la base de leur nature physique

Un milieu gélosé utilise 1-7 % d'agar-agar ou 10-20 % de gélatine pour solidifier un milieu liquide. Un milieu solide s'utilise pour isoler différents microbes les uns des autres, établir des cultures pures, réaliser des géloses inclinées et des cultures en piqûre.

Un milieu liquide ne doit contenir aucun agent solidifiant. Après inoculation et incubation, les cellules deviennent visibles sous forme de petites masses ou d'un trouble du bouillon.

Classification des milieux de culture microbiologique sur la base de leur méthode de préparation

Le milieu prêt à l'emploi est un milieu solide ou liquide, fourni en boîtes, flacons, tubes ou autres contenants, sous une forme prête à l'emploi ou utilisable immédiatement après avoir été régénéré et supplémenté.

Le milieu préparé à partir de formules déshydratées commerciales est un milieu sous forme déshydratée qui nécessite une réhydratation et un traitement avant utilisation, aboutissant soit à un milieu complet soit à un milieu incomplet dans lequel sont ajoutés des suppléments avant utilisation.

Le milieu préparé à partir de composants individuels est un milieu entièrement produit par un laboratoire de microbiologie à partir de ses ingrédients individuels.

Le milieu à la demande est produit par un système qui tient un milieu de culture stérile hautement concentré à la disposition d'un laboratoire pendant plusieurs jours. Par une dilution avec de l'eau stérile, ce système peut produire à la demande la quantité requise de milieu prêt à l'emploi, sans nécessiter d'autoclavage.

Préparation des milieux de culture microbiologique

La préparation des milieux à partir de formules commerciales déshydratées doit être effectuée en suivant les instructions du fabricant. La formulation des ingrédients de base, tels que les peptones, les extraits de levure, l'agar, les substances tampon et les antibiotiques, est modifiée pour obtenir une reproductibilité du milieu. La quantité requise de milieu déshydraté ou des ingrédients individuels est dissoute dans de l'eau distillée par une agitation continue, puis chauffée (si nécessaire). Les milieux contenant de l'agar doivent être correctement imprégnés avec une bonne agitation avant d'être chauffés. Le pH doit être ajusté et le milieu est ensuite distribué dans des contenants appropriés pour une stérilisation à la chaleur humide dans un autoclave. Les substances sensibles à la chaleur (comme les protéines ou les enzymes) sont stérilisées à l'aide de filtres membranes.

Les milieux de culture doivent être stockés à des températures spécifiées pour prévenir toute modification de leur composition et pour une durée ne dépassant pas leur durée de conservation. La préparation et le stockage aseptiques sont essentiels pour protéger les milieux de culture d'une infection microbienne. La perte d'eau durant le stockage peut être minimisée par un emballage imperméable et/ou un stockage à 5 °C ± 3 °C. Une dégradation chimique, telle que l'oxydation ou la perte de l'activité antimicrobienne, peut être retardée par une protection contre la lumière, la chaleur et la déshydratation.