Stężenie białka i wymiana buforu

Koncentracja białek

Istnieje wiele metod koncentracji białek, w tym filtracja za pomocą porowatych filtrów membranowych, dializa w roztworach hiperosmotycznych oraz wytrącanie/solenie. Ultrafiltracja zapewnia wygodną metodę, która wykorzystuje półprzepuszczalne membrany do koncentracji białek pod ciśnieniem lub siłą odśrodkową przy minimalnej denaturacji, dezaktywacji i degradacji białek. Stosując tę technikę, nadmiar płynu przechodzi przez filtr, podczas gdy docelowe białko jest zatrzymywane, zwiększając stężenie białka poprzez zmniejszenie objętości próbki. 

Wzbogacanie białek

W wzbogacaniu białek, określone grupy lub typy białek w próbce biologicznej są zagęszczane do dalszej analizy. Metody wzbogacania białek są stosowane do izolowania białek o niskiej liczebności i zmniejszania złożoności próbki. Wzbogacanie oddziela i koncentruje białka docelowe w celu poprawy dalszej analizy proteomicznej. Ultrafiltracja jest często stosowana we wzbogacaniu białek w celu oddzielenia klas białek na podstawie masy cząsteczkowej.

Wymiana buforu i odsalanie

Wyizolowane białka często muszą być przeniesione do odpowiedniego buforu w celu dalszej analizy. Wymianę buforu, odsalanie i usuwanie detergentów można przeprowadzić przy użyciu metod obejmujących:

• Dializa: Małe przepuszczalne cząsteczki, takie jak sole, detergenty, rozpuszczalniki i inne zanieczyszczenia są usuwane w oparciu o ich zdolność do przechodzenia przez membranę.
• Chromatografia kolumnowa: Sole są usuwane za pomocą kolumn do filtracji żelowej, które opierają się na wykluczeniu wielkości do separacji.
• Diafiltracja: Sole, detergenty i inne zanieczyszczenia są usuwane na podstawie ich wielkości cząsteczkowej przy użyciu porowatych membran ultrafiltracyjnych pod ciśnieniem lub siłą odśrodkową.