T7409

トリプシン ブタ膵臓由来

lyophilized powder, Type II-S, 1,000-2,000 units/mg dry solid

• CAS Number: 9002-07-7
• EC Number: 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• EC Number: 232-650-8
• MDL番号: MFCD00082094
• UNSPSCコード: 12352204
• NACRES: NA.54

特性

• タイプ: Type II-S
• 品質水準: 200
• フォーム: lyophilized powder
• 比活性: 1,000-2,000 units/mg dry solid
• 分子量: 23.8 kDa
• 保管温度: −20°C

詳細

アプリケーション

ペプチドをトリプシンで消化する場合、トリプシン:ペプチドについて約 1:100～1:20 の比を使用してください。この製品の代表的な用途は、培養表面から接着細胞を除去することです。細胞をその基材から除去するのに必要なトリプシンの濃度は、主に細胞型および培養の時期に依存します。トリプシンはまた、細胞培養期間中に細胞を再懸濁するために、タンパク質の消化に関するプロテオミクス研究において、およびさまざまなインゲル消化において使用されています†。さらなる応用例として、膜ベースの技術により結晶化を評価すること、ならびにタンパク質のフォールディング速度および収率は動的トラップの存在により制限を受ける可能性があることを試験において明確にすることが挙げられます。

生物化学的／生理学的作用

トリプシンは、リシンおよびアルギニン残基の C 末端側でペプチドを開裂させます。この反応の加水分解速度は、酸性残基が切断部位のいずれかの側にある場合に低速化し、また加水分解は、プロリン残基が切断部位のカルボキシル側にある場合には停止します。トリプシン活性の至適 pH は 7～9 です。トリプシンは、アミノ酸の合成誘導体のエステル結合およびアミド結合を開裂させるように作用することも可能です。トリプシンが作用するペプチド結合を覆い隠すカルシウムおよびマグネシウムイオンを中和するキレート剤として、EDTA がトリプシン溶液に添加されます。これらのイオンを除去すると酵素活性が上昇します。

DFP、TLCK、APMSF、AEBSEF、およびアプロチニン等を含むセリンプロテアーゼ阻害剤がトリプシンを阻害します。

構成

トリプシンは 223 アミノ酸残基からなる 1 本鎖ポリペプチドから成り、トリプシノーゲンのペプチド鎖のリジン‐イソロイシン部位の切断により N 末端のヘキサペプチドが除かれることにより生成します。アミノ酸配列は 6 つのジスルフィド結合により架橋されています。これがトリプシン、β‐トリプシンの生来の姿となります。β‐トリプシンは自己分解し、リジン‐セリン残基部位で切断し、α‐トリプシンを生成することがあります。トリプシンはセリンプロテアーゼファミリーメンバーの一つです。

注意

1 mM HCl 溶液は小分けして -20C°で保存して 1 年間安定です。Ca2⁺ の存在もまたトリプシンの自己消化を減少させ、溶液中での安定性が維持されます。トリプシンはまた 2.0 M 尿素、2.0 M グアニジン塩酸塩あるいは 0.1%（w/v）SDS 溶液中でその活性を最大限に維持します。

単位の定義

1BAEE ユニットは、BAEE を基質として用いた場合、25°C、pH 7.6 で 1 分当たり 0.001 のΔA₂₅₃ を生成します。1BTEE ユニット = 320ATEE ユニット。反応容積 = 3.2 mL（光路長 1 cm）。

調製ノート

本製品は、ハンクの均衡塩類溶液に 25 mg/mL で溶解する凍結乾燥粉末です。

安全性情報

• ピクトグラム: GHS08,GHS07
• シグナルワード: Danger
• 危険有害性情報: H315,H319,H334,H335
• 注意書き: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• 危険有害性の分類: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• ターゲットの組織: Respiratory system
• 保管分類コード: 11 - Combustible Solids
• WGK: WGK 1
• 個人用保護具 (PPE): dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves