Colture di microorganismi

Clonaggio e produzione di proteine ricombinanti

Le colture batteriche vengono utilizzate per l'espressione di proteine ricombinanti, per il clonaggio e l'amplificazione di plasmidi e per il clonaggio di BAC (cromosomi artificiali batterici) e cosmidi. Le cellule batteriche possono essere alterate perché captino e incorporino geni e plasmidi esogeni attraverso il processo di trasformazione. La trasformazione delle cellule competenti avviene tipicamente attraverso l'elettroporazione o lo shock termico di cellule trattate chimicamente per renderle competenti.

I batteri trasformati vengono quindi identificati e selezionati in base alla resistenza agli antibiotici acquisita con l’introduzione del DNA plasmidico ricombinante o utilizzando lo screening "bianco-blu”che identifica i batteri ricombinanti in quanto in grado di esprimere la β-galattosidasi. Anche il lievito può essere trasformato utilizzando l'elettroporazione o altri metodi per analisi quali il saggio del doppio ibrido per lo studio delle interazioni tra proteine e l’analisi di geni reporter per studiare l’espressione proteica.

Colture per l'isolamento e l'identificazione di microorganismi

Le colture microbiche sono importanti dal punto di vista medico per l'isolamento, la rilevazione e la differenziazione di batteri e di altri microorganismi che possono causare malattie infettive. La caratterizzazione e l'identificazione mediante metodi di coltura si basano sia sul fenotipo che sul genotipo dei microorganismi in esame. Le cellule possono essere isolate mediante semina per striscio su piastra, al fine di ottenere colonie pure. Per inibire la crescita di alcuni gruppi di microorganismi, consentendo la crescita di altri, si ricorre all'impiego di terreni selettivi. I terreni differenziali contengono composti che consentono di differenziare i microorganismi visivamente in base all'aspetto della colonia o ai cambiamenti osservabili nel terreno circostante, causati da differenze nell'attività metabolica o emolitica. Questi terreni consentono l’identificazione di batteri e altri microorganismi attraverso il differenziamento e l'eliminazione.