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Kit para RT-PCR en una sola etapa Transcriptor

sufficient for 50 reactions, sufficient for 150 reactions, suitable for RT-qPCR, suitable for RT-PCR, hotstart

• Código UNSPSC: 41106313
• NACRES: NA.55

Propiedades

• uso: sufficient for 150 reactions; sufficient for 50 reactions
• Nivel de calidad: 100
• Características: hotstart
• fabricante / nombre comercial: Roche
• envase: pkg of 150 reactions (04655885001); pkg of 50 reactions (04655877001)
• técnicas: RT-PCR: suitable; RT-qPCR: suitable
• entrada: purified RNA
• método de detección: probe-based

Descripción

Descripción general

El kit de RT-PCR de una etapa Transcriptor proporciona todos los componentes requeridos para una RT-PCR , salvo los cebadores y la plantilla, en un cómodo formato. El envase de 50 reacciones incluye también 10 reacciones de control (ARN control y mezcla de cebadores de control).
Los kits de mezcla enzimática para la RT-PCR contienen cuatro enzimas diferentes: La transcriptasa inversa Transcriptor asegura una transcripción inversa sensible y robusta con gran rendimiento; el inhibidor de la ARNasa Protector, completamente activo a elevadas temperaturas, proporciona máxima protección a la plantilla durante la transcripción inversa; y el sistema Expand, una mezcla consistente en ADN polimerasa Taq y una polimerasa de verificación y corrección, reduce al mínimo la posibilidad de mutaciones, ofreciendo gran rendimiento y fidelidad en la PCR.
El tampón de reacción para RT-PCR optimizado incluye desoxirribonucleótidos (dNTP) de gran calidad y proporciona el rendimiento general mejorado de un sistema de inicio en caliente. El componente exclusivo de inicio en caliente de la disolución tampón se une y secuestra a los cebadores a temperaturas más bajas para impedir que los cebadores se unan a sitios inespecíficos. Otro componente se une al magnesio, de una manera dependiente de la temperatura, para evitar la síntesis incontrolada del ADN. Esta nueva formulación tampón es eficaz durante la transcripción inversa así como durante la PCR, produciendo una mayor especificidad y sensibilidad.
La combinación del tampón de reacción optimizado y de la mezcla enzimática asegura una transcripción eficiente de plantillas difíciles con gran cantidad de estructura secundaria y contenido de GC sin tener que aumentar la temperatura de la reacción.

La RT-PCR en una etapa es una técnica muy sensible para determinar la presencia o la ausencia de muestras de ARN, o para cuantificar los niveles de expresión a través de análisis cualitativo, semicuantitativo o cuantitativo de los niveles de transcripción de ARN (por ejemplo, para la cuantificación de la cantidad de virus). Este método de RT-PCR también facilita la amplificación de mensajes raros para clonado. El formato en una etapa es cómodo, muestra reducción de la variabilidad de una reacción a otra y evita la contaminación al reducir al mínimo las etapas de manipulación.
El kit para RT-PCR en una sola etapa Transcriptor ofrece los extraordinarios beneficios de la transcriptasa inversa Transcriptor, así como las ventajas de un formato de RT-PCR de una etapa y de inicio en caliente.

Para la RT-PCR de una etapa de inicio en caliente, utilizando la mezcla enzimática de transcriptasa inversa Transcriptor, inhibidor de la ARNasa Protector y el sistema Expand, con un innovador tampón de inicio en caliente (pendientes de patente).

Aplicación

El kit Transcriptor para RT-PCR en una etapa está diseñado para el análisis mediante RT-PCR de punto final rápido, sensible y específico del ARN (ARN total, ARNm, ARN transcrito in vitro o ARN viral) utilizando cebadores específicos de gen.
Con un innovador tampón de reacción, el equipo combina transcripción inversa de gran rendimiento y sensible con el rendimiento mejorado de un sistema de inicio en caliente para la amplificación de gran fidelidad y rendimiento de una variedad de plantillas, entre ellas el ARN rico en GC.
El kit ofrece un método de RT-PCR en una etapa cómodo y muy sensible para generar transcritos de hasta 6,5 kb para aplicaciones tales como:

• Análisis cualitativo, semicuantitativo o cuantitativo de los niveles de transcripción del ARN
• Determinación de la presencia o ausencia de muestras de ARN
• Cuantificación de la expresión génica a través del análisis del ARN (por ejemplo, para la cuantificación de la concentración de virus)
• El clonado de ARN de hasta 6,5 kb

El formato en una etapa es cómodo, reduce la variabilidad de reacción a reacción y evita la contaminación al reducir al mínimo las etapas de manipulación.

El kit para RT-PCR en una etapa Transcriptor se ha utilizado para la amplificación de:

• fragmentos del virus de la hepatitis C (VHC)
• región CH3 de la cadena pesada y región poliA de la cadena ligera
• Virus de la leucemia murina (MLV)

Características y beneficios

• Obtiene una elevada sensibilidad y rendimiento en una amplia gama de amplificación:

Detecta cantidades de hasta sólo 1 fg de ARN total.

• Consigue gran especificidad y reduce los dímeros de cebador

Cuenta con un rendimiento excelente con el tampón de inicio en caliente del kit, pendiente de la patente.

• Produce fragmentos largos:

Genera transcritos de hasta 6,5 kb.

• Transcribe una variedad de plantillas, incluso las más difíciles (por ejemplo, ARN ricos en GC con mucha ARN)

Supera la gran cantidad de estructura secundaria con la transcriptasa inversa termoestable Transcriptor en combinación con una disolución tampón optimizada.

• Ahorra tiempo y mejora los resultados con un cómodo kit:

Minimiza las etapas de pipeteo y evita la contaminación utilizando un conjunto enzimático premezclado y tampón optimizado que contiene desoxirribonucleótidos de calidad PCR y componentes de inicio en caliente.

• Protege su muestra de ARN:

Protege su ARN de la degradación por ARNasa con el inhibidor de ARNasas Protector termoestable que es funcional durante la RT- PCR de una etapa cuando fracasan otros inhibidores de ARNasa.

• Aumenta la confianza en sus resultados:

Utilice las reacciones de control suministradas para supervisar el rendimiento.

Componentes

• Mezcla enzimática para RT-PCR que contiene la transcriptasa inversa Transcriptor, el inhibidor de la ARNasa Protector y el sistema Expand
• Tampón de reacción para RT- PCR que contiene componentes que median el inicio en caliente y desoxirribonucleótidos - concentrados x5
• Agua, calidad para PCR
• ARN control - ARN del virus de la hepatitis A (VHA), transcrito in vitro *
• Mezcla control de ARN del VHA y cebadores (cebador directo e inverso) *

* Incluido sólo en el tamaño de envase de 50 reacciones.

Calidad

La función de cada lote del kit para RT-PCR de una etapa Transcriptor se prueba en la RT- PCR. La RT-PCR se realiza con 1000 copias de ARN del virus de la hepatitis A (VHA), transcrito in vitro (también suministrado con la referencia 04 655 877 001). La configuración de la reacción de control y la posterior RT- PCR con cebadores para un fragmento de ARN del VHA de 246 pb se realiza utilizando el protocolo de RT-PCR convencional (transcriptasa inversa a +50°C durante 30 minutos) suministrado en el prospecto del envase. Con 1000 copias de la diana, se obtiene una banda claramente visible después de la electroforesis en gel de agarosa y la tinción con bromuro de etidio.
Además, la RT- PCR se realiza en una serie de dilución del ARN hepático humano total (10 ng, 1 ng y 0,1 ng). La RT- PCR con cebadores específicos para un fragmento de ApoB de 2,5 pb se realiza utilizando el protocolo de RT-PCR convencional (transcriptasa inversa a +50°C durante 30 minutos) suministrado en el prospecto del envase. Con 1 ng de ARN, se obtiene una banda claramente visible después de la electroforesis en gel de agarosa y la tinción con bromuro de etidio.

Otras notas

Descripción general de las transcriptasas inversas

Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos de diagnóstico.

Información de seguridad

• Frases de peligro: H412
• Consejos de prudencia: P273 - P501
• Clasificaciones de peligro: Aquatic Chronic 3
• Código de clase de almacenamiento: 12 - Non Combustible Liquids
• Clase de riesgo para el agua (WGK): WGK 2
• Punto de inflamabilidad (°F): does not flash
• Punto de inflamabilidad (°C): does not flash